Numeral 8.5.1 — NOM-089-SSA1-1994, Bienes y Servicios. Métodos para la determinación del contenido microbiano en productos de belleza.

8.5.1 Procedimiento

Agregar por separado 10 ml o g de muestra a 90 ml de medio CDS y CLM (Dilución 10 -1) cuando las

muestras sean miscibles en éstos.

Para las muestras que no son miscibles; en dos frascos o bolsas estériles debidamente etiquetados:

uno para CLM y otro para CDS, adicionar 10 g o ml de muestra y colocar 5 ml de tween 80 estéril a cada

uno de los frascos o bolsas previamente marcados. En caso de usar los frascos poner en baño d e agua a

45ºC hasta formar una emulsión homogénea (el tiempo de exposición en el baño de agua no debe

exceder de 15 minutos).

Posteriormente agregar a cada uno de los frascos o bolsas 85 ml de CLM y 85 ml de CDS

respectivamente y agitar perfectamente. (Dil ución 10-1)

A partir de la dilución 10 -1, realizar diluciones seriadas según el crecimiento esperado de la siguiente

manera:

TUBO DILUCION VOLUMEN AGREGADO CLM o CDS (ml)

1 10-2 o 1:100 1 ml de dilución 10 -1 9

2 10-3 o 1:1000 1 ml de dilución 10 -2 9

3 10-4 o 1:10 000 1 ml de dilución 10 -3 9

4 etc.

Para la cuenta estándar total, realizar las diluciones en CLM; y para la cuenta de hongos y levaduras,

realizar las diluciones utilizando el CDS. Mezclar hasta homogeneizar. Colocar 1 ml de cada dilución en

cajas de Petri estériles previamente marcadas con la dilución, registro y fecha, agregar de 18 a 20 ml de

medio de cultivo cuidando que la temperatura no sea mayor de 45ºC; para cuenta estándar total, utilizar

ALM; y para cuenta de hongos y levaduras, emplear AE M o PDA. Homogeneizar el inóculo en el medio de

cultivo, rotando la caja sembrada de izquierda a derecha, vertical y horizontalmente 6 veces en cada

ocasión. Dejar solidificar el medio de cultivo en las cajas. Si se emplea el método de dispersión con codos

de vidrio, utilizar 0,5 ml de inóculo por cada dilución y colocarlo en cajas de Petri conteniendo ALM y AEM

para cuenta estándar total y cuenta de hongos y levaduras respectivamente. Dispersar el inóculo con codos

de vidrio estériles. Dejar que se absorba el inóculo. Invertir las cajas e incubar: a 30°C ± 2 durante 48 horas

para la cuenta estándar total; a 22ºC durante 5 días para la cuenta de hongos y a 35ºC por 48 horas para

la cuenta de levaduras.

8.5.2 Interpretación de resultados.