Numeral 15 — NOM-213-SSA1-2018, Productos y servicios. Productos cárnicos procesados y los establecimientos dedicados a su proceso. Disposiciones y especificaciones sanitarias. Métodos de prueba.

15 Apéndice A Normativo

A.1. Cuando en este Apéndice se haga referencia a los siguientes símbolos y términos abreviados, se entenderá por:

A.1.1 ± más o menos

A.1.2 / división

A.1.3 % por ciento

A.1.4 Hh o r a

A.1.5 Lb libras

A.1.6 Mg miligramos

A.1.7 ml, mL mililitros

A.1.8 Mm milímetros

A.1.9 Nn o r m a l

A.1.10 Nm nanómetro

A.1.11 v/v volumen sobre volumen

A.1.12 p/v Peso-volumen

A.1.13 RA Reactivo analítico

A.1.14 rpm Revoluciones por minuto

A.2. Determinación de nitratos y nitritos.

A.2.1 Preparación de la muestra.

Pasar rápidamente 3 veces a través de un molino de alimentos co n placas de aproximadamente 3mm de abertura, mezcla

r

perfectamente después de cada molienda y comenzar la determinación lo más rápido posible.

A.2.2 Determinación de nitritos (método colorimétrico).

A.2.2.1 Principio (fundamento del método).

Este método se basa en la reacción del analito en medio ácido p ara formar una sal diazonio que acoplada a aminas

aromáticas produce un colorante azo (diazotización de Griess). Esta reacción de color es monitoreada fácilmente por medio de

espectrofotometría.

A.2.2.2 Equipo.

A.2.2.2.1 Balanza analítica con sensibilidad de 0,1mg;

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A.2.2.2.2 Espectrofotómetro de ultravioleta visible, y

A.2.2.2.3 Baño de vapor.

A.2.2.3 Materiales.

A.2.2.3.1 Matraz volumétrico de 250mL;

A.2.2.3.2 Tubos de Nessler de 50mL;

A.2.2.3.3 Pipetas volumétricas de 2mL;

A.2.2.3.4 Pipetas graduadas de 10mL, y

A.2.2.3.5 Vaso de precipitados de 50mL

A.2.2.4 Reactivos.

A.2.2.4.1 Reactivo de Griess.

A.2.2.4.1.1 Disolver 0,5 g de ácido sulfanílico en 30mL de ácido acético g lacial y 120mL de agua destilada. Filtrar si es

necesario (guardar en refrigeración).

A.2.2.4.1.2 Disolver 0,1g de N-1-naftiletilendiamina en 120mL de agua dest ilada calentando, enfriar, agregar 30mL de ácido

acético glacial y filtrar (guardar en refrigeración). Si cualquiera de las soluciones se torna colorida, agitar con 0,5g de zinc en polvo

y filtrar. Mezclar ambas soluciones y guardar en frasco ámbar.

A.2.2.4.2 Solución saturada de Cloruro de mercurio (HgCl2).

A.2.2.4.3 Solución patrón de nitrito de sodio.

Pesar 0,5 g de Nitrito de sodio (NaNO2) puro, disolver en 1 litro de agua destilada libre de nitritos. Diluir 10mL de esta solución

a un litro con agua destilada (1mL= 0,005 mg de NaNO2).

A.2.2.5 Procedimiento.

A.2.2.5.1 Preparación de la curva de comparación.

A.2.2.5.1.1 En el caso de que se evalúen productos cárnicos curados se preparará la siguiente curva de calibración:

En tubos de Nessler de 50mL o en tubos de ensaye de 60-70mL, me dir solución patrón: 0,0, 0,1, 0,5, 2,0, 4,0, 6,0, 8,0, 10,0,

12,0, 14,0, 16,0, 18,0mL y llevar a la marca de 50mL con agua destilada, agregar 2mL del reactivo de Griess. Mezcla r

perfectamente y después de 20 minutos, leer en Espectrofotómetr o de ultravioleta visible a 520nm. Ajustar el cero del instrumen to

con el blanco. Trazar una curva graficando concentraciones (en m g de NaNO2) contra absorciones o usar estos patrones para

comparar visualmente.

A.2.2.5.1.2 En el caso de que se evalúen productos cárnicos no curados se preparará la siguiente curva de calibración:

En tubos de Nessler de 50 mL o en tubos de ensaye de 60-70mL, m edir solución patrón de nitrito de sodio diluida: 0,0; 0,05;

0,1; 0,2; 0,4; 0,5; 0,6; 0,8 y 1,0mL y llevar a la marca de 50m L con agua destilada y libre de nitritos, agregar 2mL del reacti vo de

Griess. Mezclar perfectamente y después de 20 minutos, leer en e spectrofotómetro de ultravioleta visible a 520nm. Ajustar el ce ro

del instrumento con el blanco. Trazar una curva graficando conce ntraciones (en mg de NaNO2) contra absorciones o usar estos

patrones para comparar visualmente.

A.2.2.5.2 Desarrollo de la prueba.

A.2.2.5.2.1 Pesar 2g de muestra preparada como se indica en el inciso A.2. 1 en un vaso de precipitados de 50mL y agrega r

aproximadamente 40mL de agua libre de nitritos y calentada a 80 °C, mezclar perfectamente con un agitador teniendo cuidado de

romper todos los grumos, transferir todo el contenido a un matra z volumétrico de 250mL, lavar el vaso y el agitador con varias

porciones de agua caliente (160mL aproximadamente).

A.2.2.5.2.2 Colocar el matraz en baño de vapor a 80°C por 2H, agitando ocas ionalmente. Agregar 5mL de solución saturada

de cloruro mercúrico y mezclar. Si hay color añadir menos de 5g de carbón vegetal y agitar. Enfriar a temperatura ambiente, dil uir

a la marca con agua libre de nitritos y mezclar. Filtrar hasta obtener un filtrado claro, libre de turbidez. Tomar una alícuota de 50mL

en tubos de Nessler, agregar 2mL de reactivo de Griess, mezclar y dejar reposar 20 minutos para desarrollar color. Este colo r

puede leerse visualmente con su respectiva escala por comparació n o bien leer su absorción en un espectrofotómetro de

ultravioleta visible a 520nm, ajustando el aparato a cero de transmisión con el blanco de reactivos.

A.2.2.6 Expresión de resultados.

A.2.2.6.1 Cálculos.

En donde:

L = Lectura en curva de NaNO2

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PM = Peso de la muestra.

A.2.2.7 Informe de la prueba.

A.2.3 Determinación de Nitrato (método colorimétrico).

A.2.3.1 Principio del método.

A.2.3.2. Equipo.

A.2.3.2.1 Baño de agua;

A.2.3.2.2 Balanza analítica con sensibilidad de 0,1mg, y

A.2.3.2.3 Espectrofotómetro de ultravioleta visible.

A.2.3.3 Materiales.

A.2.3.3.1 Matraces volumétricos de 100mL;

A.2.3.3.2 Tubos de Nessler de 50mL;

A.2.3.3.3 Pipetas volumétricas de 25mL, y

A.2.3.3.4 Cápsulas de porcelana de 10cm de diámetro.

A.2.3.4 Reactivos.

A.2.3.4.1 Solución de ácido fenol disulfónico.

Calentar 6g de fenol con 37mL de ácido sulfúrico concentrado en un baño de vapor hasta disolución total, enfriar y agrega r

3mL de agua.

A.2.3.4.2 Crema de alúmina.

Preparar una solución saturada en agua de sulfato de potasio y aluminio con 12 moléculas de agua. Añadir hidróxido de

amonio con agitación constante hasta que la solución sea alcali na al tornasol, dejar que se asiente el precipitado y lavar po r

decantación con agua hasta que el agua del lavado dé ligera rea cción para sulfatos con cloruro de bario (BaCl2). Tirar el exces o

de agua y guardar la crema residual en frasco cerrado.

A.2.3.4.3 Solución de acetato de plomo básico.

Calentar 430g de acetato de plomo básico, 130g de óxido de plomo y 1 litro de agua por 30 minutos.

Dejar enfriar y sedimentar. Decantar el líquido sobrenadante y ajustar su densidad a 1,25 con agua recién hervida.

A.2.3.4.4 Solución patrón de comparación.

Disolver 1g de nitrato de sodio puro y seco en agua, diluir a 1 litro. Evaporar 10mL de esta solución a sequedad en baño de

vapor, agregar 2mL de ácido fenol disulfónico y mezclar rápida y perfectamente con la ayuda de un agitador de vidrio, calenta r

cerca de 1 minuto en baño de vapor y diluir con agua a 100ml [1mL= 0,1mg de Nitrato de sodio (NaNO3)].

A.2.3.4.5 Hidróxido de amonio grado reactivo.

A.2.3.4.6 Solución saturada de sulfato de plata.

A.2.3.5 Procedimiento.

A.2.3.5.1 Preparación de la curva de comparación.

A.2.3.5.1.1 En tubos de Nessler de 50mL, medir de 1 a 20mL de la solución patrón, agregar 5mL de hidróxido de amonio a

cada tubo y diluir a 50mL. Los tubos patrones así preparados, s on estables por algunas semanas, si se guardan perfectamente

tapados. Leer el color obtenido en un espectrofotómetro de ultr avioleta visible a 420nm. Trazar una curva graficando absorcione s

contra concentraciones.

A.2.3.5.1.2 Hacer otra curva evaporando 10mL de la solución concentrada (1 g de nitrato de sodio en 1 litro de agua), agrega r

2mL del reactivo, mezclar rápida y perfectamente con un agitado r de vidrio. Calentar un minuto en baño de agua y diluir a 1 lit ro

(1mL = 0,01mg de NaNO3). Preparar una serie de tubos usando cant idades que vayan de 1-20mL, agregar 5mL de hidróxido de

amonio a cada tubo y diluir a 50mL. Leer el color obtenido en un espectrofotómetro de ultravioleta visible a 420nm. Trazar una

curva graficando absorciones contra concentraciones.

A.2.3.5.2 Desarrollo de la prueba.

A.2.3.5.2.1 Pesar de 1-2g de muestra preparada como se indica en el inciso A . 2 .1 , de e st e A p én d i c e, en u n m at r az

volumétrico de 100mL, agregar 20-30mL de agua y calentar en baño de agua por 15 minutos agitando ocasionalmente.

A.2.3.5.2.2 Agregar 3mL de solución saturada de sulfato de plata libre de nitratos, agitar. Agregar 10mL de solución de acetato

básico de plomo y 5mL de crema de alúmina, agitando después de cada adición. Dejar enfriar y diluir a la marca con agua, agita r

y filtrar a través del papel, regresando el filtrado hasta que pase claro.

A.2.3.5.2.3 Evaporar 25mL del filtrado a sequedad, agregar 1mL de solución de ácido fenol disulfónico, mezclar rápida y

perfectamente con un agitador de vidrio, agregar 1mL de agua, 3 -4 gotas de ácido sulfúrico y calentar en baño de agua de 2-3

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minutos teniendo cuidado de no secar la muestra.

A.2.3.5.2.4 Agregar cerca de 25mL de agua y un exceso de hidróxido de amonio, transferir a un matraz volumétrico de 50mL o

a 1 tubo de Nessler de 50mL. Agregar 0,5-1,0mL de crema de alúmina si no está completamente claro; diluir a la marca y filtrar.

A.2.3.5.2.5 Preparar un blanco de muestra evaporando otros 25mL del filtra do clarificado, agregar 1mL de ácido sulfúrico

concentrado, mezclar rápida y perfectamente con un agitador de vidrio, agregar 1mL de agua y calentar en baño de agua durante

2-3 minutos, teniendo cuidado de no secar la muestra; agregar 2 5mL de agua y un exceso de hidróxido de amonio, transferir a un

tubo de Nessler de 50mL y llevar a la marca. Con este blanco aju star a cero el aparato y leer la muestra. Comparar la muestra

contra tubos patrón o leer a 420nm para interpolar con una curva patrón.

A.2.3.6 Expresión de resultados.

A.2.3.6.1 Cálculos.

en donde:

L = lectura en la curva de NaNO3 en mg

PM = peso de la muestra.

A.2.3.7 Informe de la prueba.

A.2.4 Determinación de nitratos (método colorimétrico).

A.2.4.1 Principio del método.

A.2.4.2 Equipo.

A.2.4.2.1 Agitador magnético;

A.2.4.2.2 Baño de agua;

A.2.4.2.3 Balanza analítica con sensibilidad de 0,1mg, y

A.2.4.2.4 Espectrofotómetro de ultravioleta visible.

A.2.4.3 Materiales

A.2.4.3.1 Vaso de precipitados de 250mL;

A.2.4.3.2 Matraces volumétricos de 10 y 100mL;

A.2.4.3.3 Tubos de ensaye;

A.2.4.3.4 Pipetas graduadas;

A.2.4.3.5 Pipetas volumétricas de 1mL;

A.2.4.3.6 Bureta graduada de 50mL;

A.2.4.3.7 Agitadores de vidrio;

A.2.4.3.8 Embudos de filtración de 10 cm de diámetro, y

A.2.4.3.9 Guantes de hule

A.2.4.4 Reactivos.

A.2.4.4.1 Disolver 10g de brucina en una solución de alcohol etílico al 92%. (Este reactivo es altamente tóxico. Manejarlo

tomando todas las precauciones necesarias).

A.2.4.4.2 Solución saturada de urea

A.2.4.4.3 Mezcla de ácido ortofosfórico-ácido sulfúrico 1:1 v/v

A.2.4.4.4 Alcohol etílico al 95%.

A.2.4.4.5 Solución concentrada de nitrato de sodio

Disolver 1g de NaNO3 puro y seco en agua destilada y diluir a 1 Litro (1mL = 1mg de NaNO3).

A.2.4.4.6 Solución diluida de nitrato de sodio.

Medir 10mL de la solución concentrada en un matraz volumétrico de 100mL. Llevar a la marca con agua destilada (1mL= 0,1

mg de NaNO3).

A.2.4.5 Procedimiento.

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12 de 16 03/04/2019 12:09 p. m.

A.2.4.5.1 Preparación de curva patrón de comparación.

A.2.4.5.1.1 Medir 2, 4, 6, 8 y 10mL de la solución diluida de nitrato de s odio en matraces volumétricos de 10mL y diluir a la

marca con agua destilada. En una serie de tubos de ensaye, medi r 1mL de cada una de las soluciones anteriores. Incluir un

blanco de reactivos. Agregar 0,1mL de la solución saturada de u rea y 1mL de la mezcla de ácidos orto-fosfórico-sulfúrico;

mantener a temperatura ambiente durante 5 minutos. Colocar los t ubos en un baño de agua fría (10°C), y agrega r

CUIDADOSAMENTE 1mL del reactivo de brucina a cada uno de ellos. Agregar con bureta 9mL de la mezcla ácida, mezclando

con un agitador de vidrio, después de cada adición dejar reposar un minuto, sacar los tubos del agua fría e inmediatamente

colocarlos en un baño de agua a ebullición durante 2 minutos exa ctamente. Pasar los tubos nuevamente al baño de agua fría

(10°C) y leer las absorciones en un espectrofotómetro a 420nm. C onstruir una curva graficando concentraciones contra

absorciones o usar estos patrones para comparar visualmente.

A.2.4.5.2 Pesar 10g de muestra preparada como se indica en el inciso A.2 .1, de esta Apéndice, en un vaso de precipitados de

250mL, agregar 40mL de agua y agitar durante 3 minutos; con la ayuda de 20mL de agua, lavar las paredes del vaso, calentar en

un baño de agua durante 90 minutos, enfriar y transferir a un matraz volumétrico de 100mL enjuagando el vaso con agua. Llevar a

la marca con agua, mezclar y filtrar.

A.2.4.5.3 Tomar 1mL de filtrado de cada uno de dos tubos (uno de ellos servirá como blanco de la muestra). Agregar 0,1mL de

solución saturada de urea y 1mL de mezcla de ácido orto-fosfórico-sulfúrico, mantener a temperatura ambiente durante 5 minutos.

A.2.4.5.4 Colocar todos los tubos en un baño de agua fría (10°C) y mante nerlos ahí, agregar 1mL del reactivo de brucina a los

tubos que contienen la muestra problema. A los tubos que contienen los blancos de las muestras, agregar1mL de alcohol etílico al

95%.

A.2.4.5.5 Agregar a todos y cada uno de los tubos, con bureta, 9mL de la mezcla ácida, mezclando con un agitador de vidrio

después de cada adición. Dejar reposar 1 minuto, sacar los tubo s del baño de agua fría e inmediatamente después transferirlos a

un baño de agua a ebullición durante 2 minutos exactamente.

Pasar los tubos nuevamente a un baño de agua fría (10°C) y leer la absorción en un espectrofotómetro.

A.2.4.5.6 Preparar una curva patrón de comparación como se indicó antes e interpolar las lecturas de absorción obtenidas en

la gráfica para obtener los mg de nitrato.

A.2.4.6 Expresión de resultados.

A.2.4.6.1 Cálculos.

En donde:

L = Lectura de la curva de NaNO3

PM = Peso de la muestra.

A.2.4.7 Informe de la prueba.

A.2.5 Determinación de nitritos y nitratos (método modificado de Grau y Mirna).

A.2.5.1 Principio (fundamento del método).

Este método de detección de nitrito se basa en la reacción del analito en medio ácido para formar una sal diazonio que,

acoplada a aminas aromáticas, produce un colorante azo (diazoti zación de Griess). Esta reacción de color es monitoreada

fácilmente por medio de espectrofotometría. Con el uso de sulfato de zinc e hidróxido de sodio se obtiene una efectiva

desproteinización y por tanto, una clarificación total de los extractos.

A.2.5.2 Equipo.

A.2.5.2.1 Baño de agua;

A.2.5.2.2 Espectrofotómetro de ultravioleta visible, y

A.2.5.2.3 Balanza analítica con sensibilidad de 0,1mg.

A.2.5.3 Materiales

A.2.5.3.1 Columna reductora modificada de Jones;

A.2.5.3.2 Matraces volumétricos de 250mL;

A.2.5.3.3 Vasos de precipitados de 50 y 800mL;

A.2.5.3.4 Probetas graduadas;

A.2.5.3.5 Matraces volumétricos de 100mL;

A.2.5.3.6 Tubos de Nessler de 50mL;

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A.2.5.3.7 Pipetas graduadas de 10mL, y

A.2.5.3.8 Pipetas volumétricas de 2mL.

A.2.5.4 Reactivos.

Diluir 20mL de ácido clorhídrico en 500mL de agua destilada; me zclar y agregar 50mL de hidróxido de amonio. Diluir a un litro

y mezclar; verificar el pH y ajustarlo si es necesario.

A.2.5.4.1 Solución de sulfato de cadmio 0,14 Molar

Disolver 37 g de sulfato de cadmio octahidratado en agua y diluir a 1 litro.

A.2.5.4.2 Solución de sulfato de zinc 0,42 Molar

Disolver 120g de sulfato de zinc heptahidratado en agua y diluir a un litro.

A.2.5.4.3 Solución patrón de nitrato de potasio.

A.2.5.4.4 Solución concentrada [1mL = 1mg de Nitratos (NO3)]

Transferir 10mL de la solución concentrada a un matraz volumétrico de 1 litro, llevar a la marca con agua destilada y mezclar.

A.2.5.4.5 Solución patrón de nitrito de sodio

A.2.5.4.5.1 Solución concentrada [1mL = 0,2 mg de Nitritos (NO2)].

Disolver 0,500g de nitrito de sodio puro y seco en agua destilada y diluir a 1 litro.

A.2.5.4.5.2 Solución diluida (1mL = 5µg de NO2).

Diluir 10mL de la solución concentrada en un matraz volumétrico de 1 litro, llevar a la marca con agua destilada y mezclar.

A.2.5.4.6 Zinc. Barras de aproximadamente 10cm.

A.2.5.4.7 Reactivos de Griess.

Disolver 0,5g de ácido sulfanílico en 30mL de ácido acético gla cial y 120mL de agua destilada. Filtrar si es necesario (guarda r

en refrigeración).

Disolver 0,1g de N-1-naftiletilendiamina en 120mL de agua destilada por calentamiento, enfriar, agregar 30mL de ácido acético

glacial y filtrar (guardar en refrigeración).

Si cualquiera de las soluciones se torna colorida, agitar con 0,5g de zinc en polvo y filtrar. Mezclar ambas soluciones y guardar

en frasco ámbar.

A.2.5.4.8 Solución de hidróxido de sodio 2%.

Disolver 20g de hidróxido de sodio en agua destilada libre de nitritos y diluir a un litro.

A.2.5.5 Procedimiento.

A.2.5.5.1 Preparación de la columna de cadmio (ver figura 1, de esta Apéndice).

A.2.5.5.1.1 Poner de 3-5 barras o láminas de zinc en cada uno de los dos v asos de precipitados de 800mL que contienen

500mL de solución de sulfato de cadmio. Retirar las barras de zinc cada 2-3 horas y separar la esponja de cadmio friccionando las

barras una contra otra. Después de 6-8H, decantar y lavar los d epósitos con dos porciones de 500mL de agua destilada

(PRECAUCIÓN: el cadmio siempre debe estar cubierto con la soluci ón acuosa). Transferir el cadmio con agua a un mezclador de

alta velocidad y mezclar 2-3 segundos. Retener las partículas de 8-40 mallas, repetir para incrementar la producción de partículas.

A.2.5.5.1.2 Lavar las partículas con ácido clorhídrico 0,1N, agitando ocasionalmente con un agitador de vidrio.

A.2.5.5.1.3 Dejar toda la noche en el ácido. Agitar una vez más para elimi nar el gas. Decantar y lavar con dos porciones de

100mL de agua. Llenar la columna con el cadmio hasta una altura de 8-10 cm, drenar ocasionalmente la columna durante el

llenado, sin dejar el nivel del líquido por debajo del tope de la columna de cadmio. Eliminar las burbujas de la columna golpea ndo

ligeramente las paredes.

A.2.5.5.2 Acondicionamiento de la columna.

A.2.5.5.2.1 Con la llave cerrada, agregar a la columna 10mL de solución am ortiguadora de amonio. Agregar 30mL de la

solución concentrada de nitrato de potasio. Ajustar el flujo a una velocidad de 3-5mL por minuto y no efectuar reajustes. Colec tar

el eluato en un matraz volumétrico de 100mL; justo cuando la col umna se ha vaciado, lavar las paredes con 15mL de agua.

Repetir los lavados con dos porciones de 15mL de agua, colectand o los lavados en el matraz casi cercano a los 100mL. Retirar el

matraz, diluir a la marca con agua. Tomar 50mL de la solución re ducida en un tubo de Nessler y agregar 2mL del reactivo de

Griess, mezclar y dejar reposar 25 minutos. Leer en el Espectrofotómetro, a 522 ± 2nm.

A.2.5.5.3 Reacondicionamiento de la columna.

A.2.5.5.3.1 Agregar 25mL de ácido clorhídrico 0,1N a la columna de cadmio, lavar con dos porciones de 25mL de agua

destilada y agregar 25mL de la solución amortiguadora de amonio.

A.2.5.5.4 Preparación de la curva de comparación.

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14 de 16 03/04/2019 12:09 p. m.

A.2.5.5.4.1 En el caso de que se evalúen productos cárnicos curados se deberá preparar la siguiente curva de calibración:

En tubos de Nessler de 50mL medir 0,0; 0,5; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0; 12,0; 14,0; 16,0 y 18,0mL de solución diluida de nitrito de

sodio y llevar a la marca de 50mL con agua libre de nitritos, agregar 2mL del reactivo de Griess. Mezclar perfectamente y después

de 20 minutos leer en el Espectrofotómetro de ultravioleta visi ble a 520nm, trazando posteriormente una curva graficando

concentraciones (en mg de NaNO2) contra absorciones o usar estos patrones para comparar visualmente.

A.2.5.5.4.2 En el caso de que se evalúen productos cárnicos no curados se deberá preparar la siguiente curva de calibración:

En tubos de Nessler de 50mL o en tubos de ensaye de 60-70mL, me dir solución patrón de nitrito de sodio diluida: 0,0; 0,05;

0,1; 0,2; 0,4; 0,5; 0,6; 0,8 y 1,0mL y llevar a la marca de 50m L con agua destilada y libre de nitritos, agregar 2mL del reacti vo de

Griess. Mezclar perfectamente y después de 20 minutos, leer en Espectrofotómetro de ultravioleta visible a 520nm. Ajustar el cero

del instrumento con el blanco. Trazar una curva graficando conce ntraciones (en mg de NaNO2) contra absorciones o usar estos

patrones para comparar visualmente.

A.2.5.5.5 Procedimiento.

A.2.5.5.5.1 Determinación de nitritos.

A.2.5.5.5.1.1 Pesar de 2-3g de muestra preparada como se indica en el inciso A.2.1 de este Apéndice A Normativo, en un

vaso de precipitados de 50mL, agregar aproximadamente 40mL de a gua destilada previamente calentada; mezclar perfectamente

y vaciar a un matraz volumétrico de 250mL. Lavar el vaso con agua caliente y pasar los enjuagues al matraz. Colocar el matraz en

baño de vapor durante 90 minutos, agregar 10mL de la solución de sulfato de zinc y agitar. Agregar 12mL de hidróxido de sodio al

2%, agitar vigorosamente y mantener en el baño de vapor por 10 m inutos más. Enfriar a temperatura ambiente y llevar a la marca

con agua. En caso de haber coloración, agregar aproximadamente 5g de carbón vegetal, agitar vigorosamente y filtrar.

A.2.5.5.5.1.2 Tomar una alícuota de 50mL del filtrado en un tubo de Nessler y agregar 2mL del reactivo de Griess; desarrolla r

color durante 20 minutos y leer en el Espectrofotómetro a 520nm.

A.2.5.5.5.2 Determinación de nitratos.

A.2.5.5.5.2.1 Pasar 50mL de filtrado anterior a través de la columna acondic ionada de cadmio. Regular la velocidad de elución

para que dé 3-5mL por minuto. Colectar el eluato en un matraz v olumétrico de 100mL, lavar la columna con dos porciones de

20mL de agua destilada recibiéndolos en el mismo matraz volumétrico, llevar a la marca con agua.

A.2.5.5.5.2.2 Transferir 50mL a un tubo de Nessler, agregar 2mL del reactivo de Griess y desarrollar color durante 20 minutos;

leer en el espectrofotómetro de ultravioleta visible a 520nm.

A.2.5.5.5.2.3 El blanco para ajustar a cero el espectrofotómetro, se prepara con 50mL de agua destilada y 2 mL del reactivo

de Griess.

A.2.5.5.5.2.4 Preparar una curva patrón de comparación como se indicó anteri ormente e interpolar las lecturas de absorción

obtenidas en la gráfica, para obtener los mg de nitritos, debiendo acondicionarse la columna de cadmio entre muestra y muestra.

A.2.5.5.6 Expresión de resultados.

A.2.5.5.6.1 Cálculo.

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