Apéndice E — NOM-210-SSA1-2014, Productos y servicios. Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos patógenos.

Apéndice E Normativo.

Método de referencia “Sustrato cromogénico definido y fluorogénico para determinar Enterococos

en agua”.

E.1 INTRODUCCIÓN.

Este método de prueba se basa en la detección de enterococos, tales co mo E. faecium, E. faecalis en

agua potable, fuentes de abastecimiento, agua de uso recreativo (dulce y salobre), agua envasada y hielo.

Cuando el reactivo (comercialmente disponible) es adicionado a la muestra e incubado a 41°C ± 0.5°C por

24h ± 2h, se pro duce una fluorescencia dada por los Enterococos que metabolizan el indicador nutritivo. Esta

prueba permite detectar hasta 1 UFC/100mL de Enterococos en la muestra a analizar.

E.2 MATERIALES.

E.2.1 Vasos estériles no fluorescentes;

E.2.2 Charolas con 51 celdas de un solo tamaño;

E.2.3 Charolas con 48 celdas pequeñas y 48 celdas grandes;

E.2.4 Tubos de ensaye de 20mm x 150mm, y

E.2.5 Tubos de ensaye de 16mm x 150mm.

E.3 APARATOS E INSTRUMENTOS.

E.3.1 Selladora de charolas de cuantificación (comercialmente disponibles);

E.3.2 Lámpara de luz UV de 6 watts con una longitud de onda de 366nm;

E.3.3 Incubadora a 41°C ± 0.5°C de aire o baño de agua, y

E.3.4 Termómetro con variaciones de ± 0.5°C con un intervalo de 10°C a 50°C calibrado y/o verificado.

E.4 PROCEDIMIENTO.

E.4.1 Interferencia: En el caso de agua marina la presencia de Bacillus puede interferir con la prueba en

muestras de agua (salobres) con una conductividad por arriba de 20,000 µSiemens/cm a 25°C. Por lo que es

necesario hacer una dilución 1:10 con agua estéril (deionizada o destilada).

E.4.2 Presencia/Ausencia.

E.4.2.1 Las muestras deben alcanzar una temperatura ambiente (18°C a 27°C). Separar cuidadosamente

un paquete (que contiene el reactivo) de la tira. Golpear el paquete para asegurar que todo el polvo se vaya al

fondo. Abrir el paquete rompiendo la parte superior de la línea punteada. No tocar la parte expuesta de la

misma. Agregar el reactivo a 100mL de una muestra de agua, la cual está en un recipiente estéril,

transparente y no fluorescente o comercialmente disponible. Cubrir y sellar asépticamente el recipiente. Agitar

hasta disolución del polvo. Incubar por 24h ± 2h a 41°C ± 0.5°C. Observar la fluorescencia a las 24h con la

lámpara de UV de 6 watts y 366nm de longitud onda en un cuarto oscuro . Asegurarse que la luz se encuentre

alejada de sus ojos y dirigida hacia la muestra. Si se observa fluorescencia, se confirma entonces la presencia

de enterococos.

E.4.3 NMP Procedimiento de enumeración para 100mL de muestra.

E.4.3.1 Las muestras deben al canzar una temperatura ambiente (18°C a 27°C). Separar cuidadosamente

un paquete (que contiene el reactivo) de la tira. Golpear el paquete para asegurar que todo el polvo se vaya al

fondo. Abrir el paquete rompiendo la parte superior de la línea punteada. No tocar la parte expuesta de la

misma. Agregar el reactivo a 100mL de una muestra de agua, la cual está en un recipiente estéril,

transparente y no fluorescente o comercialmente disponible. Cubrir y sellar asépticamente el recipiente. Agitar

hasta disolución del polvo. Vaciar la muestra con el reactivo dentro de la charola de cuantificación, evitar el

contacto con la hoja de la charola y el sello (consultar el instructivo del reactivo). Incubar 24h ± 2h a 41°C ±

0.5°C. Observar la fluorescencia a las 24h ± 2h con la lámpara de UV de 6 watts y 366nm de longitud onda en

un cuarto oscuro. Asegurar que la luz se encuentre alejada de sus ojos y dirigida hacia la muestra. Si se

observa fluorescencia, se confirma entonces la presencia de enterococos. Contar el núm ero de celdas

positivas (fluorescencia). Interpolar en las Tablas (ver Tabla E.1 y Tabla E.2), proporcionada por el fabricante

para determinar el NMP/100mL. El NMP en 100mL de muestra equivale, en un 95% de confianza a las UFC

presentes en 100mL.

E.4.4 Cálculos.

Para determinar presencia/ausencia no hay cálculos que realizar. Para la cuantificación referirse a las

Tablas de NMP correspondientes. Considerar en los cálculos la dilución cuando proceda.

Tabla E.1 de NMP para charolas de 51 celdas.

No. de celdas positivas NMP/100mL de muestra Límite del 95 % de confianza

Bajo Alto

0 < 1 0,0 3,7

1 1,0 0,3 5,6

2 2,0 0,6 7,3

3 3,1 1,1 9,0

4 4,2 1,7 10,7

5 5,3 2,3 12,3

6 6,4 3,0 13,9

7 7,5 3,7 15,5

8 8,7 4,5 17,1

9 9,9 5,3 18,8

10 11,1 6,1 20,5

11 12,4 7,0 22,1

12 13,7 7,9 23,9

13 15,0 8,8 25,7

14 16,4 9,8 27,5

15 17,8 10,8 29,4

16 19,2 11,9 31,3

17 20,7 13,0 33,3

18 22,2 14,1 35,2

19 23,8 15,3 37,3

20 25,4 16,5 39,4

21 27,1 17,7 41,6

22 28,8 19,0 43,9

23 30,6 20,4 46,3

24 32,4 21,8 48,7

25 34,4 23,3 51,2

26 36,4 24,7 53,9

27 38,4 26,4 56,6

28 40,6 28,0 59,5

29 42,9 29,7 62,5

30 45,3 31,5 65,6

31 47,8 33,4 69,0

32 50,4 35,4 72,5

33 53,1 37,5 76,2

34 56,0 39,7 80,1

35 59,1 42,0 84,4

36 62,4 44,6 88,8

37 65,9 47,2 93,7

38 69,7 50,0 99,0

39 73,8 53,1 104,8

40 78,2 56,4 111,2

41 83,1 59,9 118,3

42 88,5 63,9 126,2

43 94,5 68,2 135,4

44 101,3 73,1 146,0

45 109,1 78,6 158,7

46 118,4 85,0 174,5

47 129,8 92,7 195,0

48 144,5 102,3 224,1

49 165,2 115,2 272,2

50 200,5 135,8 387,6

51 > 200,5 146,1 Infinito

Tabla No. E.2 de NMP (UFC/100mL) para charolas de 48 celdas pequeñas y 48 celdas grandes.

No. Large Wells

positive

No. Small Wells Positive

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24

0 <1 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.1 15.1 16.1 17.1 18.1 19.1 20.2 21.2 22.2 23.3 24.3

1 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.1 8.1 9.1 10.1 11.1 12.1 13.2 14.2 15.2 16.2 17.3 18.3 19.3 20.4 21.4 22.4 23.5 24.5 25.6

2 2.0 3.0 4.1 5.1 6.1 7.1 8.1 9.2 10.2 11.2 12.2 13.3 14.3 15.4 16.4 17.4 18.5 19.5 20.6 21.6 22.7 23.7 24.8 25.8 26.9

3 3.1 4.1 5.1 6.1 7.2 8.2 9.2 10.3 11.3 12.4 13.4 14.5 15.5 16.5 17.6 18.6 19.7 20.8 21.8 22.9 23.9 25.0 26.1 27.1 28.2

4 4.1 5.2 6.2 7.2 8.3 9.3 10.4 11.4 12.5 13.5 14.6 15.6 16.7 17.8 18.8 19.9 21.0 22.0 23.1 24.2 25.3 26.3 27.4 28.5 29.6

5 5.2 6.3 7.3 8.4 9.4 10.5 11.5 12.6 13.7 14.7 15.8 16.9 17.9 19.0 20.1 21.2 22.2 23.3 24.4 25.5 26.6 27.7 28.8 29.9 31.0

6 6.3 7.4 8.4 9.5 10.6 11.6 12.7 13.8 14.9 16.0 17.0 18.1 19.2 20.3 21.4 22.5 23.6 24.7 25.8 26.9 28.0 29.1 30.2 31.3 32.4

7 7.5 8.5 9.6 10.7 11.8 12.8 13.9 15.0 16.1 17.2 18.3 19.4 20.5 21.6 22.7 23.8 24.9 26.0 27.1 28.3 29.4 30.5 31.6 32.8 33.9

8 8.6 9.7 10.8 11.9 13.0 14.1 15.2 16.3 17.4 18.5 19.6 20.7 21.8 22.9 24.1 25.2 26.3 27.4 28.6 29.7 30.8 32.0 33.1 34.3 35.4

9 9.8 10.9 12.0 13.1 14.2 15.3 16.4 17.6 18.7 19.8 20.9 22.0 23.2 24.3 25.4 26.6 27.7 28.9 30.0 31.2 32.3 33.5 34.6 35.8 37.0

10 11.0 12.1 13.2 14.4 15.5 16.6 17.7 18.9 20.0 21.1 22.3 23.4 24.6 25.7 26.9 28.0 29.2 30.3 31.5 32.7 33.8 35.0 36.2 37.4 38.6

11 12.2 13.4 14.5 15.6 16.8 17.9 19.1 20.2 21.4 22.5 23.7 24.8 26.0 27.2 28.3 29.5 30.7 31.9 33.0 34.2 35.4 36.6 37.8 39.0 40.2

12 13.5 14.6 15.8 16.9 18.1 19.3 20.4 21.6 22.8 23.9 25.1 26.3 27.5 28.6 29.8 31.0 32.2 33.4 34.6 35.8 37.0 38.2 39.5 40.7 41.9

13 14.8 16.0 17.1 18.3 19.5 20.6 21.8 23.0 24.2 25.4 26.6 27.8 29.0 30.2 31.4 32.6 33.8 35.0 36.2 37.5 38.7 39.9 41.2 42.4 43.6

14 16.1 17.3 18.5 19.7 20.9 22.1 23.3 24.5 25.7 26.9 28.1 29.3 30.5 31.7 33.0 34.2 35.4 36.7 37.9 39.1 40.4 41.6 42.9 44.2 45.4

15 17.5 18.7 19.9 21.1 22.3 23.5 24.7 25.9 27.2 28.4 29.6 30.9 32.1 33.3 34.6 35.8 37.1 38.4 39.6 40.9 42.2 43.4 44.7 46.0 47.3

16 18.9 20.1 21.3 22.6 23.8 25.0 26.2 27.5 28.7 30.0 31.2 32.5 33.7 35.0 36.3 37.5 38.8 40.1 41.4 42.7 44.0 45.3 46.6 47.9 49.2

17 20.3 21.6 22.8 24.1 25.3 26.6 27.8 29.1 30.3 31.6 32.9 34.1 35.4 36.7 38.0 39.3 40.6 41.9 43.2 44.5 45.9 47.2 48.5 49.8 51.2

18 21.8 23.1 24.3 25.6 26.9 28.1 29.4 30.7 32.0 33.3 34.6 35.9 37.2 38.5 39.8 41.1 42.4 43.8 45.1 46.5 47.8 49.2 50.5 51.9 53.2

19 23.3 24.6 25.9 27.2 28.5 29.8 31.1 32.4 33.7 35.0 36.3 37.6 39.0 40.3 41.6 43.0 44.3 45.7 47.1 48.4 49.8 51.2 52.6 54.0 55.4

20 24.9 26.2 27.5 28.8 30.1 31.5 32.8 34.1 35.4 36.8 38.1 39.5 40.8 42.2 43.6 44.9 46.3 47.7 49.1 50.5 51.9 53.3 54.7 56.1 57.6

21 26.5 27.9 29.2 30.5 31.8 33.2 34.5 35.9 37.3 38.6 40.0 41.4 42.8 44.1 45.5 46.9 48.4 49.8 51.2 52.6 54.1 55.5 56.9 58.4 59.9

22 28.2 29.5 30.9 32.3 33.6 35.0 36.4 37.7 39.1 40.5 41.9 43.3 44.8 46.2 47.6 49.0 50.5 51.9 53.4 54.8 56.3 57.8 59.3 60.8 62.3

23 29.9 31.3 32.7 34.1 35.5 36.8 38.3 39.7 41.1 42.5 43.9 45.4 46.8 48.3 49.7 51.2 52.7 54.2 55.6 57.1 58.6 60.2 61.7 63.2 64.7

24 31.7 33.1 34.5 35.9 37.3 38.8 40.2 41.7 43.1 44.6 46.0 47.5 49.0 50.5 52.0 53.5 55.0 56.5 58.0 59.5 61.1 62.6 64.2 65.8 67.3

25 33.6 35.0 36.4 37.9 39.3 40.8 42.2 43.7 45.2 46.7 48.2 49.7 51.2 52.7 54.3 55.8 57.3 58.9 60.5 62.0 63.6 65.2 66.8 68.4 70.0

26 35.5 36.9 38.4 39.9 41.4 42.8 44.3 45.9 47.4 48.9 50.4 52.0 53.5 55.1 56.7 58.2 59.8 61.4 63.0 64.7 66.3 67.9 69.6 71.2 72.9

27 37.4 38.9 40.4 42.0 43.5 45.0 46.5 48.1 49.6 51.2 52.8 54.4 56.0 57.6 59.2 60.8 62.4 64.1 65.7 67.4 69.1 70.8 72.5 74.2 75.9

28 39.5 41.0 42.6 44.1 45.7 47.3 48.8 50.4 52.0 53.6 55.2 56.9 58.5 60.2 61.8 63.5 65.2 66.9 68.6 70.3 72.0 73.7 75.5 77.3 79.0

29 41.7 43.2 44.8 46.4 48.0 49.6 51.2 52.8 54.5 56.1 57.8 59.5 61.2 62.9 64.6 66.3 68.0 69.8 71.5 73.3 75.1 76.9 78.7 80.5 82.4

30 43.9 45.5 47.1 48.7 50.4 52.0 53.7 55.4 57.1 58.8 60.5 62.2 64.0 65.7 67.5 69.3 71.0 72.9 74.7 76.5 78.3 80.2 82.1 84.0 85.9

31 46.2 47.9 49.5 51.2 52.9 54.6 56.3 58.1 59.8 61.6 63.3 65.1 66.9 68.7 70.5 72.4 74.2 76.1 78.0 79.9 81.8 83.7 85.7 87.6 89.6

32 48.7 50.4 52.1 53.8 55.6 57.3 59.1 60.9 62.7 64.5 66.3 68.2 70.0 71.9 73.8 75.7 77.6 79.5 81.5 83.5 85.4 87.5 89.5 91.5 93.6

33 51.2 53.0 54.8 56.5 58.3 60.2 62.0 63.8 65.7 67.6 69.5 71.4 73.3 75.2 77.2 79.2 81.2 83.2 85.2 87.3 89.3 91.4 93.6 95.7 97.8

34 53.9 55.7 57.6 59.4 61.3 63.1 65.0 67.0 68.9 70.8 72.8 74.8 76.8 78.8 80.8 82.9 85.0 87.1 89.2 91.4 93.5 95.7 97.9 100.2 102.4

35 56.8 58.6 60.5 62.4 64.4 66.3 68.3 70.3 72.3 74.3 76.3 78.4 80.5 82.6 84.7 86.9 89.1 91.3 93.5 95.7 98.0 100.3 102.6 105.0 107.3

36 59.8 61.7 63.7 65.7 67.7 69.7 71.7 73.8 75.9 78.0 80.1 82.3 84.5 86.7 88.9 91.2 93.5 95.8 98.1 100.5 102.9 105.3 107.7 110.2 112.7

37 62.9 65.0 67.0 69.1 71.2 73.3 75.4 77.6 79.8 82.0 84.2 86.5 88.8 91.1 93.4 95.8 98.2 100.6 103.1 105.6 108.1 110.7 113.3 115.9 118.6

38 66.3 68.4 70.6 72.7 74.9 77.1 79.4 81.6 83.9 86.2 88.6 91.0 93.4 95.8 98.3 100.8 103.4 105.9 108.6 111.2 113.9 116.6 119.4 122.2 125.0

39 70.0 72.2 74.4 76.7 78.9 81.3 83.6 86.0 88.4 90.9 93.4 95.9 98.4 101.0 103.6 106.3 109.0 111.8 114.6 117.4 120.3 123.2 126.1 129.2 132.2

40 73.8 76.2 78.5 80.9 83.3 85.7 88.2 90.8 93.3 95.9 98.5 101.2 103.9 106.7 109.5 112.4 115.3 118.2 121.2 124.3 127.4 130.5 133.7 137.0 140.3

41 78.0 80.5 83.0 85.5 88.0 90.6 93.3 95.9 98.7 101.4 104.3 107.1 110.0 113.0 116.0 119.1 122.2 125.4 128.7 132.0 135.4 138.8 142.3 145.9 149.5

42 82.6 85.2 87.8 90.5 93.2 96.0 98.8 101.7 104.6 107.6 110.6 113.7 116.9 120.1 123.4 126.7 130.1 133.6 137.2 140.8 144.5 148.3 152.2 156.1 160.2

43 87.6 90.4 93.2 96.0 99.0 101.9 105.0 108.1 111.2 114.5 117.8 121.1 124.6 128.1 131.7 135.4 139.1 143.0 147.0 151.0 155.2 159.4 163.8 168.2 172.8

44 93.1 96.1 99.1 102.2 105.4 108.6 111.9 115.3 118.7 122.3 125.9 129.6 133.4 137.4 141.4 145.5 149.7 154.1 158.5 163.1 167.9 172.7 177.7 182.9 188.2

45 99.3 102.5 105.8 109.2 112.6 116.2 119.8 123.6 127.4 131.4 135.4 139.6 143.9 148.3 152.9 157.6 162.4 167.4 172.6 178.0 183.5 189.2 195.1 201.2 207.5

46 106.3 109.8 113.4 117.2 121.0 125.0 129.1 133.3 137.6 142.1 146.7 151.5 156.5 161.6 167.0 172.5 178.2 184.2 190.4 196.8 203.5 210.5 217.8 225.4 233.3

47 114.3 118.3 122.4 126.6 130.9 135.4 140.1 145.0 150.0 155.3 160.7 166.4 172.3 178.5 185.0 191.8 198.9 206.4 214.2 222.4 231.0 240.0 249.5 259.5 270.0

48 123.9 128.4 133.1 137.9 143.0 148.3 153.9 159.7 165.8 172.2 178.9 186.0 193.5 201.4 209.8 218.7 228.2 238.2 248.9 260.3 272.3 285.1 298.7 313.0 328.2

49 135.5 140.8 146.4 152.3 158.5 165.0 172.0 179.3 187.2 195.6 204.6 214.3 224.7 235.9 248.1 261.3 275.5 290.9 307.6 325.5 344.8 365.4 387.3 410.6 435.2

Tabla E.2 de NMP (Continuación).

No. Large Wells

positive

No. Small Wells Positive

25 26 27 8 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48

0 25.3 26.4 27.4 28.4 29.5 30.5 31.5 32.6 33.6 34.7 35.7 36.8 37.8 38.9 40.0 41.0 42.1 43.1 44.2 45.3 46.3 47.4 48.5 49.5

1 26.6 27.7 28.7 29.8 30.8 31.9 32.9 34.0 35.0 36.1 37.2 38.2 39.3 40.4 41.4 42.5 43.6 44.7 45.7 46.8 47.9 49.0 50.1 51.2

2 27.9 29.0 30.0 31.1 32.2 33.2 34.3 35.4 36.5 37.5 38.6 39.7 40.8 41.9 43.0 44.0 45.1 46.2 47.3 48.4 49.5 50.6 51.7 52.8

3 29.3 30.4 31.4 32.5 33.6 34.7 35.8 36.8 37.9 39.0 40.1 41.2 42.3 43.4 44.5 45.6 46.7 47.8 48.9 50.0 51.2 52.3 53.4 54.5

4 30.7 31.8 32.8 33.9 35.0 36.1 37.2 38.3 39.4 40.5 41.6 42.8 43.9 45.0 46.1 47.2 48.3 49.5 50.6 51.7 52.9 54.0 55.1 56.3

5 32.1 33.2 34.3 35.4 36.5 37.6 38.7 39.9 41.0 42.1 43.2 44.4 45.5 46.6 47.7 48.9 50.0 51.2 52.3 53.5 54.6 55.8 56.9 58.1

6 33.5 34.7 35.8 36.9 38.0 39.2 40.3 41.4 42.6 43.7 44.8 46.0 47.1 48.3 49.4 50.6 51.7 52.9 54.1 55.2 56.4 57.6 58.7 59.9

7 35.0 36.2 37.3 38.4 39.6 40.7 41.9 43.0 44.2 45.3 46.5 47.7 48.8 50.0 51.2 52.3 53.5 54.7 55.9 57.1 58.3 59.4 60.6 61.8

8 36.6 37.7 38.9 40.0 41.2 42.3 43.5 44.7 45.9 47.0 48.2 49.4 50.6 51.8 53.0 54.1 55.3 56.5 57.7 59.0 60.2 61.4 62.6 63.8

9 38.1 39.3 40.5 41.6 42.8 44.0 45.2 46.4 47.6 48.8 50.0 51.2 52.4 53.6 54.8 56.0 57.2 58.4 59.7 60.9 62.1 63.4 64.6 65.8

10 39.7 40.9 42.1 43.3 44.5 45.7 46.9 48.1 49.3 50.6 51.8 53.0 54.2 55.5 56.7 57.9 59.2 60.4 61.7 62.9 64.2 65.4 66.7 67.9

11 41.4 42.6 43.8 45.0 46.3 47.5 48.7 49.9 51.2 52.4 53.7 54.9 56.1 57.4 58.6 59.9 61.2 62.4 63.7 65.0 66.3 67.5 68.8 70.1

12 43.1 44.3 45.6 46.8 48.1 49.3 50.6 51.8 53.1 54.3 55.6 56.8 58.1 59.4 60.7 62.0 63.2 64.5 65.8 67.1 68.4 69.7 71.0 72.4

13 44.9 46.1 47.4 48.6 49.9 51.2 52.5 53.7 55.0 56.3 57.6 58.9 60.2 61.5 62.8 64.1 65.4 66.7 68.0 69.3 70.7 72.0 73.3 74.7

14 46.7 48.0 49.3 50.5 51.8 53.1 54.4 55.7 57.0 58.3 59.6 60.9 62.3 63.6 64.9 66.3 67.6 68.9 70.3 71.6 73.0 74.4 75.7 77.1

15 48.6 49.9 51.2 52.5 53.8 55.1 56.4 57.8 59.1 60.4 61.8 63.1 64.5 65.8 67.2 68.5 69.9 71.3 72.6 74.0 75.4 76.8 78.2 79.6

16 50.5 51.8 53.2 54.5 55.8 57.2 58.5 59.9 61.2 62.6 64.0 65.3 66.7 68.1 69.5 70.9 72.3 73.7 75.1 76.5 77.9 79.3 80.8 82.2

17 52.5 53.9 55.2 56.6 58.0 59.3 60.7 62.1 63.5 64.9 66.3 67.7 69.1 70.5 71.9 73.3 74.8 76.2 77.6 79.1 80.5 82.0 83.5 84.9

18 54.6 56.0 57.4 58.8 60.2 61.6 63.0 64.4 65.8 67.2 68.6 70.1 71.5 73.0 74.4 75.9 77.3 78.8 80.3 81.8 83.3 84.8 86.3 87.8

19 56.8 58.2 59.6 61.0 62.4 63.9 65.3 66.8 68.2 69.7 71.1 72.6 74.1 75.5 77.0 78.5 80.0 81.5 83.1 84.6 86.1 87.6 89.2 90.7

20 59.0 60.4 61.9 63.3 64.8 66.3 67.7 69.2 70.7 72.2 73.7 75.2 76.7 78.2 79.8 81.3 82.8 84.4 85.9 87.5 89.1 90.7 92.2 93.8

21 61.3 62.8 64.3 65.8 67.3 68.8 70.3 71.8 73.3 74.9 76.4 77.9 79.5 81.1 82.6 84.2 85.8 87.4 89.0 90.6 92.2 93.8 95.4 97.1

22 63.8 65.3 66.8 68.3 69.8 71.4 72.9 74.5 76.1 77.6 79.2 80.8 82.4 84.0 85.6 87.2 88.9 90.5 92.1 93.8 95.5 97.1 98.8 100.5

23 66.3 67.8 69.4 71.0 72.5 74.1 75.7 77.3 78.9 80.5 82.2 83.8 85.4 87.1 88.7 90.4 92.1 93.8 95.5 97.2 98.9 100.6 102.4 104.1

24 68.9 70.5 72.1 73.7 75.3 77.0 78.6 80.3 81.9 83.6 85.2 86.9 88.6 90.3 92.0 93.8 95.5 97.2 99.0 100.7 102.5 104.3 106.1 107.9

25 71.7 73.3 75.0 76.6 78.3 80.0 81.7 83.3 85.1 86.8 88.5 90.2 92.0 93.7 95.5 97.3 99.1 100.9 102.7 104.5 106.3 108.2 110.0 111.9

26 74.6 76.3 78.0 79.7 81.4 83.1 84.8 86.6 88.4 90.1 91.9 93.7 95.5 97.3 99.2 101.0 102.9 104.7 106.6 108.5 110.4 112.3 114.2 116.2

27 77.6 79.4 81.1 82.9 84.6 86.4 88.2 90.0 91.9 93.7 95.5 97.4 99.3 101.2 103.1 105.0 106.9 108.8 110.8 112.7 114.7 116.7 118.7 120.7

28 80.8 82.6 84.4 86.3 88.1 89.9 91.8 93.7 95.6 97.5 99.4 101.3 103.3 105.2 107.2 109.2 111.2 113.2 115.2 117.3 119.3 121.4 123.5 125.6

29 84.2 86.1 87.9 89.8 91.7 93.7 95.6 97.5 99.5 101.5 103.5 105.5 107.5 109.5 111.6 113.7 115.7 117.8 120.0 122.1 124.2 126.4 128.6 130.8

30 87.8 89.7 91.7 93.6 95.6 97.6 99.6 101.6 103.7 105.7 107.8 109.9 112.0 114.2 116.3 118.5 120.6 122.8 125.1 127.3 129.5 131.8 134.1 136.4

31 91.6 93.6 95.6 97.7 99.7 101.8 103.9 106.0 108.2 110.3 112.5 114.7 116.9 119.1 121.4 123.6 125.9 128.2 130.5 132.9 135.3 137.7 140.1 142.5

32 95.7 97.8 99.9 102.0 104.2 106.3 108.5 110.7 113.0 115.2 117.5 119.8 122.1 124.5 126.8 129.2 131.6 134.0 136.5 139.0 141.5 144.0 146.6 149.1

33 100.0 102.2 104.4 106.6 108.9 111.2 113.5 115.8 118.2 120.5 122.9 125.4 127.8 130.3 132.8 135.3 137.8 140.4 143.0 145.6 148.3 150.9 153.7 156.4

34 104.7 107.0 109.3 111.7 114.0 116.4 118.9 121.3 123.8 126.3 128.8 131.4 134.0 136.6 139.2 141.9 144.6 147.4 150.1 152.9 155.7 158.6 161.5 164.4

35 109.7 112.2 114.6 117.1 119.6 122.2 124.7 127.3 129.9 132.6 135.3 138.0 140.8 143.6 146.4 149.2 152.1 155.0 158.0 161.0 164.0 167.1 170.2 173.3

36 115.2 117.8 120.4 123.0 125.7 128.4 131.1 133.9 136.7 139.5 142.4 145.3 148.3 151.3 154.3 157.3 160.5 163.6 166.8 170.0 173.3 176.6 179.9 183.3

37 121.3 124.0 126.8 129.6 132.4 135.3 138.2 141.2 144.2 147.3 150.3 153.5 156.7 159.9 163.1 166.5 169.8 173.2 176.7 180.2 183.7 187.3 191.0 194.7

38 127.9 130.8 133.8 136.8 139.9 143.0 146.2 149.4 152.6 155.9 159.2 162.6 166.1 169.6 173.2 176.8 180.4 184.2 188.0 191.8 195.7 199.7 203.7 207.7

39 135.3 138.5 141.7 145.0 148.3 151.7 155.1 158.6 162.1 165.7 169.4 173.1 176.9 180.7 184.7 188.7 192.7 196.8 201.0 205.3 209.6 214.0 218.5 223.0

40 143.7 147.1 150.6 154.2 157.8 161.5 165.3 169.1 173.0 177.0 181.1 185.2 189.4 193.7 198.1 202.5 207.1 211.7 216.4 221.1 226.0 231.0 236.0 241.1

41 153.2 157.0 160.9 164.8 168.9 173.0 177.2 181.5 185.8 190.3 194.8 199.5 204.2 209.1 214.0 219.1 224.2 229.4 234.8 240.2 245.8 251.5 257.2 263.1

42 164.3 168.6 172.9 177.3 181.9 186.5 191.3 196.1 201.1 206.2 211.4 216.7 222.2 227.7 233.4 239.2 245.2 251.3 257.5 263.8 270.3 276.9 283.6 290.5

43 177.5 182.3 187.3 192.4 197.6 202.9 208.4 214.0 219.8 225.8 231.8 238.1 244.5 251.0 257.7 264.6 271.7 278.9 286.3 293.8 301.5 309.4 317.4 325.7

44 193.6 199.3 205.1 211.0 217.2 223.5 230.0 236.7 243.6 250.8 258.1 265.6 273.3 281.2 289.4 297.8 306.3 315.1 324.1 333.3 342.8 352.4 362.3 372.4

45 214.1 220.9 227.9 235.2 242.7 250.4 258.4 266.7 275.3 284.1 293.3 302.6 312.3 322.3 332.5 343.0 353.8 364.9 376.2 387.9 399.8 412.0 424.5 437.4

46 241.5 250.0 258.9 268.2 277.8 287.8 298.1 308.8 319.9 331.4 343.3 355.5 368.1 381.1 394.5 408.3 422.5 437.1 452.0 467.4 483.3 499.6 516.3 533.5

47 280.9 292.4 304.4 316.9 330.0 343.6 357.8 372.5 387.7 403.4 419.8 436.6 454.1 472.1 490.7 509.9 529.8 550.4 571.7 593.8 616.7 640.5 665.3 691.0

48 344.1 360.9 378.4 396.8 416.0 436.0 456.9 478.6 501.2 524.7 549.3 574.8 601.5 629.4 658.6 689.3 721.5 755.6 791.5 829.7 870.4 913.9 960.6 1011.2

49 461.1 488.4 517.2 547.5 579.4 613.1 648.8 686.7 727.0 770.1 816.4 866.4 920.8 980.4 1046.2 1119.9 1203.3 1299.7 1413.6 1553.1 1732.9 1986.3 2419.6 >2419.6

E.4.5 Interpretación de resultados.

Si se observa fluo rescencia en los frascos, tubos o charolas, se confirma entonces la presencia de

Enterococos.

E.4.6 Criterios de validez de la prueba.

E.4.6.1 Deberá llevarse a cabo un control de calidad en cada nuevo lote de reactivo, el cual consiste del

siguiente protocolo:

E.4.6.1.1 Para cada tipo de cepa ATCC enlistadas más adelante, estriar en AST o a placas de agar sangre

e incubar a 35°C por 18h a 24h ± 2h.

E.4.6.1.2 De cada cepa bacteriana, tomar 1 colonia e inocular un tubo de ensaye con 5mL de agua

deionizada estéril. Cerrar y agitar completamente.

E.4.6.1.3 A continuación tomar una asada de 1µL (microlitros) del tubo de ensayo y usar para inocular un

frasco con 100mL de agua deionizada o destilada estéril, debidamente etiquetado. Seguir los pasos del inciso

E.4.2 de presencia/ausencia, señalados anteriormente.

E.4.6.1.4 Comparar los resultados de esta prueba con los resultados esperados de la siguiente tabla:

Control ATCC Resultados esperados

E. faecium 700221 o 35667 Fluorescencia

Serratia marcescens (Gram -) 43862 No fluorescencia

Aerococcus viridians (Gram +) 10400 No fluorescencia

E.4.7 Informe de prueba.

Informar como presencia, ausencia o el resultado basado en el cálculo de la densidad de enterococos

determinado en la Tabla de NMP E.1 y E.2.

E.5 MEDIOS DE CULTIVO.

E.5.1 Medio que contiene el sustrato fluorogénico definido (comercialmente disponible).